本篇文章给大家谈谈质粒转化，以及质粒转化步骤对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。

质粒转化步骤

1、)取100ul新鲜制备的感受态细胞，加入质粒1ul DNA混匀，同时设置对照组(未加质粒，未加受体菌，已知具有转化活性的DNA)。冷冻的感受态细胞要在冰上解冻，待管中最后一点冰融化后，迅即加入DNA. 解冻感受态细胞温度高于0℃，会降低转化效率。

2、质粒提取主要包括三个步骤：菌体扩繁。菌体裂解释放质粒DNA。质粒DNA的分离与纯化。质粒提取办法中，最常用的是碱裂解法，它具有得率高，适用面广，快速，纯度高等特色。

3、操作步骤： 本实验方法适用于从 1-10ml 过夜培养的大肠杆菌菌液中提取质 粒。

如何提高质粒转化率

细胞状态：维持细胞生长及健康旺盛是提高转染效率的重要条件。建议选择对数生长期的细胞为佳，此时期的细胞生长旺盛，可能得到更高的转染效率，切勿选择传代次数过多，基因型可能发生改变的细胞。

基本的亚克隆操作包含四步：首先用合适的限制性内切酶切割载体与插入片段，接着用T4DNA连接酶将DNA片段与载体连接，然后转化宿主大肠杆菌，最后筛选出含有所需结构的重组质粒。连接仅仅包含两段线型DNA分子的连接，通常形成环状的重组分子。

器皿的清洁度、化合物及无机离子（rb+、mn+、二甲基亚砜能适当提高转化率）、质粒与细胞个数的比例（质粒与细胞个数比例在1：1以下时，转化率随着加入dna的量增加而呈线性增加）。

菌体悬浮不完全会导致裂解不完全，质粒的提取纯度和得率都会下降。通常需要在里面加入RNA酶(RNase A)，RNA酶的作用很清楚，降解掉溶液中的RNA。通常选用Tris-HCl作为体系中pH稳定缓冲液。

Ti质粒的转化有哪些机理?

杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。

农杆菌转化法的原理是构建双元表达载体系统，由两种质粒组成，一种是位于大肠杆菌中的穿梭质粒，另一种是位于农杆菌中的辅助性质粒。

一切基因工程载体都是由某种细菌质粒或病毒来充任，而在众多的载体中目前仅有Ti质粒在转化植物受体方面取得较多的成功。所以Ti质粒是当前植物基因工程中最常用的载体系统。

目前主要采用两种Ti质粒基因转化载体系统，即共整合载体系统和双元载体系统（binaryvectorsystem）。共整合载体Ti质粒上的T-DNA区编码致瘤基因序列，一般为pBR322质粒DNA所取代，但保留两末端重复序列。

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